本标准适用于食品添加剂中铅的限量试验的定量试验。

      本标准参照采用1983年联合国粮农组织的世界卫生组织(FAO/WHO)食品添加剂联合专家委员会发布的有关铅的测定方法。


  1　原理


      样品经处理加入柠檬铵、***和盐酸羟胺等，消除铁、铜、锌等离子干扰，在pH8.5～9.0时，铅离子与双硫腙生成红色络合物，用三氯甲烷提取，与标准系列，比较做限量试验或定量试验。


  2　试剂


      除特别注明外，本标准所用试剂均为去离子水或无铅水。

  2.1　硝酸(GB 626-78)。

  2.2　硫酸(GB 625-77)。

  2.3　氨水(GB 631-77)(1+1)：如含铅，须用全玻璃蒸馏器重蒸馏。

  2.4　盐酸(GB 622-77)。

  2.5　三氯甲烷(GB 682-78)：不应含氧化物。

  2.6　酚红指示液：0.1%乙醇溶液。

  2.7　柠檬酸氢二铵(HGB 3294-60):50%溶液。

      称取100g柠檬酸氢二铵，溶于100ml水中，加2滴酚红指示液，加氨水(1+1)调节pH8.5～9.0（由黄变红，再多加2滴），用双硫腙三氯甲烷溶液提取数次，每次10～20ml，至三氯甲烷层绿色不变为止，弃去三氯甲烷洗涤二次，每次5ml，弃去三氯甲烷层，加水稀释至200ml。

  2.8　盐酸羟胺（HG 3-967-76):20%溶液。

      称取20g盐酸羟胺，加40ml水溶解，加2滴酚红指示液，加氨水(1+1)调节pH至8.5～9.0（由黄变红，再多加2滴），用双硫腙三氯甲烷溶液提取数次，每次10～20ml，至三氯甲烷层绿色不变为止，再用三氯甲烷洗二次，每次5ml，弃去三氯甲烷层加盐酸(1+1)呈酸性，加水至100ml。

  2.9　***：10%溶液。

  2.10　二苯基硫巴腙（双硫腙）(HGB 3343-60):0.05%三氯甲烷溶液，保存于冰箱中，必要时按下述方法纯化。称取0.5g研细的双硫腙，溶于50ml三氯甲烷中，如有残渣，可用滤纸过滤于250mlŠ分液漏斗中，用氨水(1+99)提取三次，每次100ml，将提取液用棉花过滤至500ml分液漏斗中，用盐酸(1+1)调至酸性，将沉淀出的双硫腙用200,200,100ml三氯甲烷提取三次，合并三氯甲烷为双硫腙储备溶液。

  2.10.1　双硫腙使用液：吸取1.0ml双硫腙储备溶液，加9ml三氯甲烷，混匀。

      用1cm比色杯，以三氯甲烷调节零点,于波长510nm处测吸光度(A),用式(1)算出配制100ml双硫腙使用液(70%透光率)所需双硫腙储备溶液的毫升数(V)。


10(2-lg70) 1.55
  V=--------------------- =---------- ………… (1)
A A

  2.11　铅标准溶液：精密称取0.1598g高纯硝酸铅(HG 3-1309-80)，加10ml 1%硝酸，溶解后定量移入100ml容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液1ml相当于1mg铅。临用前水稀释成1ml相当于10μg铅。

  2.12　1%硝酸：取1ml硝酸(GB 626-78),加水稀释至100ml。


    3　仪器


    所用玻璃仪器均用10～20%硝酸浸泡24h以上，用自来水反复冲洗，*后用水冲洗干净。

  3.1　分光光度计。

  3.2　125ml分液漏斗。

  3.3　250ml凯氏烧瓶或250ml三角烧瓶。


    4　样品处理


  4.1　无机样品的“样品处理”可按各标准文本中规定的方法进行。

  4.2　有机样品的“样品处理”除按各标准文本中规定的外，一般按下述程序进行。

  4.2.1　湿法消解：称取5.0g样品，置于250ml凯氏烧瓶或三角烧瓶中，加入10ml硝酸浸润样品，放置片刻（或过夜）后，缓缓加热，待作用缓和后稍冷，沿瓶壁加入5ml硫酸，再缓缓加热，至瓶中溶液开始变成棕色，不断滴加硝酸（如有必要可滴加些高氯酸，在操作过程中，应注意防止爆炸），至有机质分解完全，继续加热，至生成大量的二氧化硫白色烟雾，*后溶液应呈无色或微带黄色。冷却后将溶液移入50ml容量瓶中，用少量水分次洗涤凯氏烧瓶或三角烧瓶，将洗液一并移入容量瓶中，加水至刻度，混匀备用。每10ml溶液相当于1.0g样品。

      取一坩埚，按上述方法做试剂空白试验。

  4.2.2　干法消解：村法适用于不适合用湿法消解的样品。

      称取5.0g样品于瓷坩埚中，加入适量硫酸湿润样品，小心炭化后，加2ml硝酸和5滴硫酸，小心加热，直到白色烟雾挥尽，移入高温炉中，于550℃灰化完全。冷后取出。加1ml硝酸(1+1)溶液，加热使灰分溶解，将样品液转移到50ml容量瓶中（必要时过滤），并用少量水洗涤坩埚，洗液一并移入容量瓶中，加水至刻度，混匀备用。每10ml溶液相当于1.0g样品。

      取一坩埚，按上述方法做试剂空白试验。


    5　测定


  5.1　限量试验

      吸取适量样品液及铅的限量标准液（含铅不低于5μg），分别置于125ml分液漏斗中，各加1%硝酸至20ml。
      向样品液及铅的限量标准液中各加入1ml50%柠檬铵溶液、1ml20%盐酸羟胺溶液和2滴酚红指示液，用氨水(1+1)调至红色，再各加2ml 10%***溶液，混匀后，加入5.0ml双硫腙使用液，剧烈振摇1min，静置分层后，三氯甲烷层经脱脂棉滤入1cm比色杯中，于波长510nm处，以三氯甲烷调节零点，测定吸光度，或进行目视比色，样品液的吸光度或色度不应大于铅的限量标准液的吸光度或色度。

      若样品经处理，则铅限量标准也应同法处理。

    5.2　定量测定

      吸取10.0ml（或适量）样品液和同量的试剂空白液，分别置于125ml分液漏斗中，各加1%硝酸至20ml。

      吸取铅标准溶液0.0,0.1,0.3,0.5,0.7,1.0ml（分别相当于0,1,3,5,7,10μg铅）。分别置于125ml的分液漏斗中。各加1%硝酸至20ml。向样品液、试剂空白液及铅标准溶液中各加入1ml 50%柠檬酸铵溶液，1ml 20%盐酸羟胺溶液和2滴酚红指示液，用氨水(1+1)调至红色，再各加入2ml 10%***溶液，混匀，各加5.0ml双硫腙使用液，剧烈振摇1min，静置分层后，三氯甲烷经脱脂棉滤入1cm比色杯中，于波长510nm处，以零管调节点，测定吸光度，绘制标准曲线。
  5.3　计算


(A1-A2)×1000
  C=-------------------------------- ………………… (2)

V2
m×------ ×1000

V1

    式中：C-样品中铅的含量，mg/kg或mg/L;

A1-样品液中铅的含量，μg;

A2-试剂空白液中铅的含量，μg;

m-样品质量（体积），g(ml);

V1-样品处理后定容体积，ml;

V2-测定时所取样品液体积，ml